הוראות שקופיות הרכבה
לפני שתתחיל בתהליך הכנת השקופיות, וודא שאספת את כל החומרים הדרושים, כולל שקופיות, תלושי כיסוי, טיפות או צינורות, וכל כימיקלים או כתמים שאתה מתכוון להשתמש בהם.
ישנם שני סוגים עיקריים של שקופיות איתם אתה עובד:
1. מגלשת הזכוכית השטוחה הסטנדרטית.
2. השפל או שקופית הבאר, הכוללת באר קטנה או כניסה במרכזו שנועד להחזיק טיפת מים או חומר נוזלי. אלה בדרך כלל יקרים יותר ומשמשים בדרך כלל ללא תלוש כיסוי.
ניתן לייצר שקופיות סטנדרטיות מפלסטיק או מזכוכית, בגודל של 1 x 3 אינץ '(25X75 מ"מ) ובעובי 1 עד 1.2 מ"מ.
עבור מגלשות רטובות, תלוש כיסוי או זכוכית כיסוי חיוני. זהו חתיכת זכוכית דקה במיוחד, מרובעת (או פלסטיק) הממוקמת בזהירות מעל טיפת הדגימה. ללא הכיסוי, מתח פני השטח יגרום לטיפה ליצור צורת כיפה. הכיסוי מונה מתח זה, ומבטיח שהמדגם טמון שטוח לבדיקה מדויקת עם מיקוד מינימלי. יתר על כן, הכיסוי משמש כמגן הגנה, ומונע את העדשה האובייקטיבית להפריע לירידת הדגימה.
רכיבי שקופיות מיקרוסקופ
רכיבי מיקרוסקופ מתייחסים לשיטות המשמשות לאבטחת שקופיות או דגימות מיקרוסקופ לצורך תצפית. יש בעיקר ארבעה סוגים:
1. תושבי שקופיות:אלה הם הסוג הנפוץ ביותר וכוללים הצבת דגימה על מגלשת זכוכית שטוחה, לרוב בעזרת מדיום הרכבה (כמו נוזל או ג'ל) כדי להחזיק אותו במקום. לאחר מכן מוסיפים תלוש כיסוי כדי להגן על הדגימה ולספק משטח שטוח לצפייה.
2. חלל או תושבים היטב:לשקופיות אלה יש באר קטנה או דיכאון במרכז, שנועדו להחזיק טיפת נוזלים, כמו מים או נוזל הרכבה מתמחה. הם משתמשים בעבודה עם דגימות הדורשות טבילה בנוזל.
3. תושבים זמניים:תקעים אלה אינם מיועדים לאחסון או תצפית לטווח הארוך. הם כוללים שיטות פשוטות ומהירות כמו הצבת דגימה על מגלשה עם טיפת מים. לרוב הם משמשים לצפייה באורגניזמים חיים או דגימות רגישות לזמן.
4. תושבים קבועים:אלה מיועדים לאחסון ותצפית לטווח הארוך. הם כרוכים בהליכים מורכבים יותר, כולל שימוש בתקשורת הרכבה מיוחדת שמתקשים לאורך זמן, ומכסים את הדגימה במדיום שקוף. סוג זה של הר משמש לרוב לשקופיות חינוכיות ולמחקר מדעי.
לכל סוג של הר יש את היישומים הספציפיים שלו ונבחר על בסיס אופי הדגימה ומטרת התצפית.
ארבע דרכים נפוצות להעביר מגלשת מיקרוסקופ
ישנן מספר שיטות נפוצות להעברת שקופית מיקרוסקופ, תלוי בסוג הדגימה ובמטרת התבוננות. להלן ארבע דרכים נפוצות להעביר מגלשת מיקרוסקופ:
הרכבה יבשה:
נוהל: בשיטה זו, דגימה מונחת ישירות על שקופית מיקרוסקופ נקייה ויבשה. לעתים קרובות הוא משמש לדגימות שאינן דורשות לחות או טבילה נוספת בנוזל.
יישומים: הרכבה יבשה מתאימה להתבוננות בדגימות מוצקות כמו חלקי צמח, שיער או מינרלים.
הרכבה רטובה:
נוהל: טיפת נוזל קטנה (בדרך כלל מים או נוזל הרכבה מתמחה) מונחת על השקופית, ואז הנוספים מתווספים לטיפה זו. תלוש כיסוי מונח בעדינות מעל הדגימה כדי למנוע ייבוש ועיוות.
יישומים: תופעות רטובות משמשות להתבוננות באורגניזמים חיים, תאים או דגימות הדורשות טבילה בנוזל.
הרכבת דלעת:
נוהל: טכניקה זו כוללת הצבת דגימה על מגלשה ואז לחיצה עליו בעדינות עם תלוש כיסוי או שקופית אחרת כדי לשטח אותה. זה נפוץ לרקמות רכות או לחלקים צמחיים עדינים ליצירת שכבה דקה ושקופה להתבוננות.
יישומים: רכיבי דלעת משמשים לבחינת רקמות, במיוחד בביולוגיה של צמחים.
הרכבה למריחה:
נוהל: כמות קטנה של הדגימה (בדרך כלל חומר נוזלי או חצי נוזלי) מתפשטת דק ואגודה על פני שקופית, לרוב בעזרת שפת שקף אחר. לאחר מכן מותר לייבש אוויר או לתקן עם חומר כימי.
יישומים: בדרך כלל משמשים תושבי מריחה לתצפית על מיקרואורגניזמים כמו חיידקים או להכנת מריחות דם למיקרוסקופיה.
שיטות אלה מספקות סוגים שונים של דגימות והדרישות הספציפיות שלהן להתבוננות. הבחירה בטכניקת ההרכבה תלויה בגורמים כמו אופי הדגימה, מטרת התבוננות ורמת הפירוט והבהירות הרצויה.
כתמי מיקרוסקופ
כתמי מיקרוסקופ, הידועים גם בשם כתמים או צבעים ביולוגיים, הם חומרים המשמשים במיקרוסקופיה כדי לשפר את הניגודיות והנראות של דגימות ביולוגיות. הם פועלים על ידי קשירה סלקטיבית לרכיבים סלולריים ספציפיים, כמו חלבונים, חומצות גרעין או ליפידים, המאפשרת הדמיה קלה יותר ובידול של מבנים סלולריים. להלן כמה סוגים נפוצים של כתמי מיקרוסקופ:
1. המטוקסילין ואאוזין (H&E):
סוג: כתם שילוב.
שימוש: אחד הכתמים הנפוצים ביותר בהיסטולוגיה, כתמי המטוקסילין בגרעינים תאים כחולים-סגולים, ואילו אאוזין מכתים ציטופלזמה וכמה מבנים חוץ תאיים ורודים.
2. מתילן כחול:
סוג: צבע בסיסי.
שימוש: מכתים גרעיני תאים כחולים. הוא משמש בדרך כלל ללימודי ציטולוגיה ומיקרוביולוגיה כלליים.
3. Giemsa:
סוג: כתם שילוב.
שימוש: משמש להכתמת תאי דם, הוא מבדיל רכיבים גרעיניים וציטופלסמיים במגוון צבעים, ומאפשר זיהוי של סוגי תאים שונים.
4 גרם כתם:
סוג: כתם שילוב.
שימוש: מבדיל בין שתי קטגוריות עיקריות של חיידקים: חיובי גרם (השומרים על כתם סגול הגביש) וגרם-שלילי (העוסק בספראנין מונה).
5. הכתם של רייט:
סוג: כתם שילוב.
שימוש: משמש בעיקר למריחות דם, כתם זה מאפשר בידול של סוגי תאי הדם וזיהוי חריגות.
6. יוד של לוגול:
סוג: כתם מבוסס יוד.
שימוש: משמש בשילוב עם יוד של גראם, ניתן להשתמש בו כדי לשפר את הניגודיות של מבנים סלולריים מסוימים.
7. שמן אדום O:
סוג: צבע ליפופילי.
שימוש: נקשר ספציפית לליפידים, מה שהופך אותו לשימושי לכתים של מבנים כמו טיפות שומן בתוך תאים.
8. חומצה תקופתית-שקיעה (PAS):
סוג: כתם מבוסס תגובה כימית.
שימוש: מגיב עם פחמימות, מדגיש מבנים כמו גליקוגן, רירית וגליקופרוטאינים אחרים.
9. טולוידין כחול:
סוג: צבע בסיסי.
שימוש: מכתים רכיבים חומציים בתאים וברקמות, כולל גרגרי תאי תורן וחומצות גרעין.
10. ספראנין:
סוג: צבע בסיסי.
שימוש: משמש כ- Counterstain בכתמי גרם כדי לצבוע חיידקים שליליים גרם.
אלה רק כמה דוגמאות, ויש הרבה כתמים מיוחדים אחרים המשמשים למטרות ספציפיות במיקרוסקופיה, כמו כתמים מיוחדים לרקמות חיבור, סיבי עצב או מבני תאים ספציפיים. בחירת הכתם תלויה בסוג הדגימה ובמידע הדרוש מהבדיקה המיקרוסקופית.
צעדים מכתים מיקרוסקופיים
1. התחל בהכנת שקופית הרט רטובה, מיקום הדגימה שלך על מגלשת מיקרוסקופ נקייה.
2. בעזרת טפטפת עיניים או פיפטה, אספו בזהירות טיפת הכתם שנבחר.
3. הנח את טיפת הכתם הזו בקצה החיצוני של תלוש הכיסוי שלך, והבטיח שהוא יוצר קשר עם קצה השקופית.
4. כדי להקל על התפלגות הכתם אחידה, מקם חתיכת מפית או מגבת נייר לאורך הצד הנגדי של תלוש הכיסוי, ולחץ אותו בחוזקה על הקצה.
5. במידת הצורך, החל ירידת כתמים נוספת כדי להבטיח כיסוי מלא של הדגימה שלך.
6. השקופית שלך מוכנה כעת לחלוטין לתצפית תחת המיקרוסקופ.
